Изучение противовирусной активности препарата «ТефлексА» в отношении коронавируса человека

Реферат

Цель исследования: оценка вирулицидной активности дезинфицирующего средства «ТефлексА» в отношении коронавируса OC43 в сравнении с 70% этанолом.
Объекты исследования: образцы дезинфицирующего средства (кожного антисептика) «ТефлексА» с концентрацией 0,8 и 0,4% производства ООО "Софт Протектор".
Методология. Инфекционная активность коронавируса OC43 была оценена после 5-, 15- и 30-минутной инкубации с исследуемыми образцами при помощи титрования на культуре клеток H23. 
Результаты. Инкубация вируса в течение 5 минут с любым из использованных антисептиков приводила к потере инфекционной активности вируса. Для каждого из антисептиков с течением времени отмечалась дальнейшая инактивация вируса вплоть до полной его инактивации.
Заключение. Полученные данные позволяют говорить об эффективности дезинфицирующего средства (кожного антисептика) «ТефлексА» против коронавируса человека при использовании в качестве средства дезинфекции латексных перчаток. Активность средства "ТефлексА" была сопоставима с активностью референс-препарата 70% этанола.

Введение

Вирусы представляют собой серьёзную угрозу здоровью, а в тяжёлых случаях и жизни человека. Достаточно упомянуть опасные такие патогены, как ВИЧ, грипп, корь, ряд геморрагических лихорадок и др. Для предотвращения борьбы с таких инфекций применяются вакцины, а для лечения заболеваний – противовирусные препараты. Однако как вакцины, так и средства терапии разработаны далеко не для всех вирусных патогенов человека. В качестве примера можно привести коронавирус COVID-19, вызвавший пандемию в 2019 – 2020 гг. В этих случаях единственной эффективной мерой борьбы с распространением вирусной инфекции является соблюдение карантинных и санитарных мер. В структуре таких мероприятий важную роль играет правильный выбор и применение эффективных и доступных антисептиков и дезинфектантов. Целью настоящего исследования была оценка вирулицидной активности дезинфицирующего средства «ТефлексА» в отношении коронавируса человека OC43 при нанесении на поверхность латексных перчаток.

Материалы и методы.

Реактивы и приборы

• Культура клеток H23, аденокарцинома легкого человека (ATCC® CRL-5800);
• Коронавирус человека, штамм OC43, 
• Полная среда RPMI-1640, содержащая 2 mM L-глутамина, 250 мг/л гентамицина, 10% эмбриональной сыворотки крупного рогатого скота;
• Физиологический раствор (0.9% раствор NaCl в дистиллированной воде, стерильный, Биолот, Санкт-Петербург, Кат. № 1.2.1.3);
• Флаконы для клеточных культур 25 мл (Corning, США)
• 96-луночные планшеты (Corning, США, Кат. № 3585);
• Наконечники для автоматических пипеток 20-200 мкл;
• Ламинарный бокс, второго класса защиты (БОВ-001-АМС, Миасс, Россия);
• CO2-инкубатор MCO-175 (Panasonic, Япония);

Дизайн исследования.

Клетки H23 сеяли во флаконы для клеточных культур или в 96-луночные планшеты и инкубировали 24 часа в атмосфере 5% CO2 при 36°С до формирования монослоя. Вирус наращивали в монослое клеток во флаконах для клеточных культур в течение 72 ч при 36°С в атмосфере 5% CO2.
В работе использовали следующие образцы антисептических средств, предоставленные Заказчиком:
Тефлекс А (антисептик), концентрация действующего вещества 0,8%
Тефлекс А (антисептик), концентрация действующего вещества 0,4%
Этанол 70%
Для анализа противовирусной активности 1 мл каждого из образцов смешивали в 1,5 мл пробирке с 0,1 мл вируссодержащей жидкости (исходный титр вируса 5×105 TCID50/мл). В контрольную пробирку вместо антисептика вносили 0,1 мл физиологического раствора. Пробирки инкубировали при комнатной температуре в течение 5, 15 или 30 минут, после чего в вируссодержащей жидкости определяли инфекционную активность вируса как описано ниже. В каждой группе образцов использовали по три аналитические параллели.
Титрование вируса. Из исследуемой вируссодержащей жидкости готовили серию 10 кратных разведений (10-1 – 10-7) на среде MEM. Этими разведениями заражали клетки и инкубировали в термостате в течение 72 часов. Титр вируса определяли по результатам реакции гемагглютинации (РГА, см. далее). Противовирусную активность образцов оценивали по снижению титра вируса в опытных лунках планшетов по сравнению с контрольными (группа контроля вируса). 
Реакция гемагглютинации (РГА). Для определения наличия коронавируса OC43 в культуральной жидкости проводили реакцию гемагглютинации. Для этого культуральную жидкость переносили в лунки планшета для иммунологических реакций, после чего добавляли равный объем 1% куриных эритроцитов в физиологическом растворе. Планшеты инкубировали при 20°С в течение 1 ч, после чего визуально проводили учет результатов. За титр вируса принимали наибольшее разведение вируссодержащего материала, при котором наблюдалась положительная реакция гемагглютинации. Положительным считали результат реакции, при котором эритроциты равномерно покрывали всё дно лунки. При отрицательной реакции эритроциты в виде маленького диска или «пуговки» располагаются в центре дна анализируемой лунки планшета. Титр вируса в каждом из экспериментальных образцов определяли по методу Рида и Менча.

Результаты исследования.

Результаты определения инфекционного титра коронавируса OC43 до и после инкубации с образцами антисептиков суммированы в табл.1.

Как видно из представленных результатов, инкубация вируса в течение 5 минут с любым из использованных антисептиков приводила к потере инфекционной активности вируса. Для каждого из образцов с течением времени отмечалась дальнейшая инактивация вируса вплоть до полной его инактивации (титр вируса ниже предела порога детекции).

Заключение.

Инкубация вируса в течение 5 минут с любым из использованных антисептиков приводила к потере инфекционной активности вируса. Для каждого из антисептиков с течением времени отмечалась дальнейшая инактивация вируса вплоть до полной его инактивации. Полученные данные, таким образом, позволяют говорить об эффективности дезинфицирующего средства (кожного антисептика) «ТефлексА» против коронавируса человека при использовании в качестве средства дезинфекции латексных перчаток. Активность средства "ТефлексА" была сопоставима с активностью референс-препарата 70% этанола.