Онлайн консультант

Современные подходы к изучению и оценке вирулицидной активности дезинфицирующих средств - СОФТ ПРОТЕКТОР
г. Санкт-Петербург, ул. Химиков, дом 28. +7(812) 319-30-90

Современные подходы к изучению и оценке вирулицидной активности дезинфицирующих средств

Журнал «Дезинфекционное дело» №1, 2004 г.; стр. 54-57,
Н.Н.Носик, Д.Н.Носик, П.Г.Дерябин, Е.Б.Иванова
ГУ НИИ вирусологии им. Д.И.Ивановского РАМН, Москва

Введение. Широкое распространение вирусных инфекций, многие из которых носят эпидемический характер, трудность разработки этиологических средств лечения и, соответственно, недостаточность выбора эффективных противовирусных препаратов заставляют обратить особое внимание на разработку и применение специфических и неспецифических предупредительных мер борьбы, а именно возможность предотвращения вирусной контаминации и создание специфического иммунитета, достигаемого путем вакцинации. Поэтому разработка эффективных дезинфекционных препаратов, обладающих вирулицидными свойствами, является важным и необходимым направлением в борьбе с вирусными инфекциями.
Большое разнообразие вирусов требует и различных подходов к их обезвреживанию.
Выбор тест-вирусов. Различаясь по своей структуре, размерам и химическому составу, вирусы обладают и различной устойчивостью к воздействию физико-химических факторов. Одни вирусы относительно легко инактивируются, другие высокорезистентны к действию различных химических соединений (например, аденовирусы, парвавирусы). В целом же вирусы во внешней среде дольше сохраняются, чем бактерии и простейшие, уступая лишь спорам (рис. 1, рисунки в тексте статьи не преведены) [4]. По устойчивости к дезинфекции вирусы, например, связанные с водной средой, также более резистентны, чем большинство бактерий (рис. 2). 
Выбор тест-вирусов при разработке дезинфицирующих средств. И в этом плане трудно рассчитывать, что одно какое-либо дезинфицирующее средство (ДС) будет одинаково эффективно в отношении большинства высокопатогенных вирусов. Поэтому при раработке ДС с вирулицидной активностью целесообразно проводить испытания с ДНК- и РНК-содержащими вирусами, с вирусами обладающих оболочкой и безоболочечными вирусами, мелкими и крупными вирусами и т.п.
Выбор тест-вирусов при оценке дезинфицирующих средств. При оценке вирулицидной активности ДС должны быть учтены все те же факторы, что и при разработке ДС. Поэтому следует использовать несколько тест-вирусов, которые позволили бы охватить максимально широкий спектр вирусов. В большинстве стран используют не менее трех различных вирусов для оценки вирулицидных свойств дезинфектантов.
Примеры физико-химических свойств вирусов, используемых для оценки обеззараживания биологических продуктов и их устойчивость к ингибирующему воздействию приведены в таблице, опубликованным Европейским обществом по оценке биологических продуктов в качестве руководства (табл). 
При этом оценка зависит от:
• Типа и титра тест-вируса
• Характера используемого вирусного материала
• Метода культивирования вируса
• Методов определения вирулииидной активности
• Химического состава ДС.
В этой связи ключевым моментом является выбор тест-вирусов. Прежде всего нужно иметь в виду, что любой тест-вирус представляет собой модельную систему, которая будет отличаться от того, с чем мы можем встретиться в реальности. Как правило, мы имеем дело с вирусами, культивируемыми в лаборатории с использованием тканевых культур, и по своим свойствам они могут отличаться от «диких» вариантов. По данным Европейского агентства по оценке медицинских продуктов, даже различные лаборатор¬ные штаммы одного и того же вируса отличаются друг от друга и от естественно циркулирующих вирусов [3].
Следующим важным моментом, который следует учитывать при выборе тест-вируса и проведении оценки действия ДС, является тот факт, что для ряда вирусов характерно соединение с белками биологических жидкостей организма, что резко уменьшает их доступность к ДС, и, соответственно, повышает их устойчивость. Причем такая связь может быть не только механической, но и специфической. Так, белок М вируса гепатита В имеет эпитоп, позволяющий связываться с поляризованным альбумином в результате чего доступность вируса для дезинфектантов резко снижается.
В отношении другого вируса, на борьбу с которым брошены силы и средства всего мира, - вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), тоже не все так однозначно. Считается, что он относительно легко инактивируется тем же алкоголем, и в окружающей среде достаточно быстро гибнет. Однако более детальные исследования показали, что после обработки 70% изопропанолом или этиловым спиртом в течение 30 минут остается инфекционный вирус |5]. Оказалось также, что инфекционный ВИЧ можно обнаружить на поверхности через длительное время (рис. 3). Кроме того, наблюдается и различная степень устойчивости изолятов ВИЧ [1, 2].
Исходя из социальной значимости инфекций, вызы¬ваемых вирусами гепатитов и вирусом иммунодефицита человека, при испытании вирулицидной активности ДС необходимо проводить исследования с этими вирусами, несмотря на отсутствие адекватной лабораторной модели и высокого риска работы с вирусами, относящимися к 2 группе патогенности.
Таким образом, требования к выбору тест-вирусов для испытания и оценки ДС можно сформулировать следующим образом:
• Эпидемиологическая и социальная значимость инфекции, вызываемой тем или иным вирусом (даже при отсутствии адекватной экспериментальной модели)
• Включение в исследование как РНК-, так и ДНК-содержащих групп вирусов с различной степенью устойчивости к ДС
• Наличие лабораторной модели при относительной простоте культивирования вируса и безопасности для работающих лиц.
Примеры физико-химических свойств вирусов, используемых для оценки обеззараживания биологических продуктов и их устойчивость к ингибирующему воздействию приведены в таблице, опубликованной Европейским обществом но оценке биологических продуктов в качестве руководства (табл.).
На основании имеющихся данных по физико-химическим свойствам различных вирусов, их способности образовывать комплексы и быть защищенными от действия дезинфицирующих агентов, а также с учетом международного опыта по контролю ингибирования инфекционных вирусов, в качестве тест-вирусов могут быть рекомендованы, помимо уже упомянутых вируса гепатита В и ВИЧ, следующие вирусы:
• вирус гриппа как крупный РНК-содержащий вирус
• пикорнавирусы (вирус полиомиелита или вирус энцефаломиокардита мышей) как мелкие безоболочечные РНК-содержащие вирусы. Использование вируса энцефаломиокардита мышей предпочтительней с точки зрения безопасности работающего персонала, так как он не является патогенным для человека. Применение вируса полиомиелита, даже вакцинного штамма, весьма проблематично в связи с глобальной программой ликвидации полиомиелита
• вирус герпеса или аденовируса как крупные оболочечные ДНК- содержащие вирусы.

Вирус
Семейство
Род
Хозяин
Геном
Обо-лочка
Размер
нм
Устойчи-
вость к воздейст-
вию
Везикулярного
стоматита
Rhabdo
Vesicu
lo virus
лошадь
РНК
есть
70-175
низкая
ВИЧ
Retro
Lentivirus
человек
РНК
есть
80-100
низкая
Гриппа, типа А
Orthomyx
Ortho
myxoviridae
человек, птицы
РНК
есть
50-130
низкая
Герпеса простого
Herpes
viridae
человек
ДНК
есть
120-200
средняя
Полиовируса, тип 1
(Сэбин)
Picorna
Enterovirus
человек
РНК
нет
25-30
средняя
Энцефаломио-кардита
Picorna
Cardiovirus
мышь
РНК
нет
25-30
средняя
Реовирус 3
Reo
Orthreovirus
несколько
РНК
нет
60-80
средняя
Гепатита, тип А
Picorna
Hepato
virus
человек
РНК
нет
25-30
высокая
Парвовирусы
Parvo
Parvo
virus
собака,
свинья
ДНК
нет
18-24
очень
высокая

Схема испытания вирулицидной активности дезсредств является практически такой же, как и описанная в нормативных документах для других микроорганизмов и должна включать разделы по испытанию in vitro, испытания изделий медицинского назначения, посуды, белья, поверхностей, обеззараживания воздуха в помещениях и т.д.
Методы определения тест-вирусов и критерии оценки. Методы определения вирусов могут быть качественными и количественными и проводиться должны в соответствии с принципами GLP (Good Laboratory Practice).
Предпочтительней применение количественных методов определения степени инактивации инфекционности тест-вируса: по цитопатическому действию вируса или по бляшкообразованию, а также по специфической гибели мышей при испытании in vivo, по подавлению антигенов или по определению нуклеиновых кислот вируса с использованием коммерческих тест-систем, со специфичностью и чувствительностью соответствующими нормативным требованиям сегодняшнего дня.
Исследования проводят в чувствительных модельных системах в зависимости от использованного тест-вируса с необходимыми повторами и соответствующими конт-ролями, что очень важно для получения статистически достоверных результатов.
При этом следует, насколько это возможно, показать, что уменьшение инфекционности вируса произошло в результате его инактивации примененным ДС. Для этой цели нужно исследовать кинетику инактивации вируса, которая должна быть изучена и представлена в табличной и графической форме.
Тест-вирус следует использовать с максимальным титром, так как чем он выше, тем более точные результаты и, соответственно, оценка будут получены.
Насколько это возможно, пробы с вирусом в модельных экспериментах должны титроваться без таких предварительных манипуляций, как центрифугирование, диализ, длительное хранение. Когда же неизбежны такие процедуры, как удаление ингибирующего вещества, удаление нейтрализатора, хранение образцов для титрования их всех одновременно, то необходимо включить в исследование все соответствующие контроли, с тем чтобы исключить влияние процедур на интерпретацию результатов.
Влияние вещества на модельную систему детекции, как, например, токсическое действие на клетки, должно протоколироваться, так как это является лимитирующим фактором в определении вирулицидного эффекта. 
Методы амплификации нуклеиновых кислот (ПЦР) при своей чувствительности и специфичности определения вирусного генома применяются для определения вируса в случае отсутствия модельной системы, например, вируса гепатита В. Лимитирующим фактором применения ПЦР является тот факт, что с помощью этого метода может определяться и инактивированный, неинфекционный вирус.
Несколько слов о критериях оценки. Расчет фактора ингибиции вируса может быть сделан по формуле, учитывающей как титр вируса, так и взятый объем (поскольку они могу отличаться):
R=(V1 x T1):( V2 x T2)
где R - фактор ингибиции, V1 — объем начального материала, Т1 - концентрация вируса в исходном материале, V2 - объем материала после процедуры и Т2 - титр вируса в конечном материале. Результат обычно выражается в логарифмической шкале ... 
Заключение. Значительные различия вирусов по их устойчивости к физико-химическим воздействиям требуют использования нескольких тест-вирусов при разработке и оценке свойств дезинфектантов как препаратов с вирулицидными свойствами.
Особое внимание следует уделить стандартизации методов оценки вирулицидных свойств с учетом современных требований, предъявляемых как к препарата так и к тест-вирусам.

ЛИТЕРАТУРА
1. Кузнецова Н.В. Консервация вирусов иммунодефицита человека и чувствительность к антивирусным препаратам // Автореферат на соискание степени к.б.н. М., 1994.-С. 17-19.
2. НосикД.Н., Калнина Л.Б., ЗлобинА.Ю. и др. Характе¬ристика штаммов вируса иммунодефицита человека, выделенных от ВИЧ-инфицированных лиц на территории СССР // Вопр. вирусологии, 1992. - № 1. — С. 24-47.
3. Note for Guidance on virus validation studies: the design, contribution and interpretation of studies validating the inactivation and removal of viruses // CPMP, The European Agency for the Evaluation ofMedical products, London, 1996.-P. 13.
4. Payment P. Waterbornc viruses and parasites: resistance to treatment and disinfection // Interlaken-98. - P. 1—11.
5. Tjotta E., Hungnes O., Grinde B. Survival of HIV-1 activity after disinfection, temperature and pH changes, or drying//J. Med. Virol., 1991. - 35 (4). - P. 223-227.

Категории
НОВИНКА! ГудФут
Комплексное средство по уходу за ногами
Ремонт и стройка
Строительные биоциды и пластификаторы
Медицина
Профессиональная дезинфекция, антисептики
Ветеринария
Профессиональная дезинфекция
Пищевая промышленность
Профессиональная дезинфекция, мойка
Бытовая дезинфекция
Моющие, чистящие, дезинфицирующие средства, антисептики для рук




Наши зарубежные партнеры:

        

Категории

Разделы

Контакты

Адрес: г. Санкт-Петербург,
ул. Химиков, дом 28
Телефон/факс: Многоканальный
+7(812) 319-30-90

Карта Google